中国医学创新  2015, Vol. 12 Issue (27): 1-5    DOI: 10.3969/j.issn.1674-4985.2015.27.001
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siRNA干扰SIAH对细胞活性和α-synuclein泛素化降解通路的影响*
①徐州医学院附属连云港医院 江苏 连云港 222002
Effect of siRNA Interference SIAH on Cell Activity and α-synuclein Ubiquitin Degradation Pathway
Affiliated Lianyungang Hospital of Xuzhou Medical College,Lianyungang 222002,China
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摘要 目的:研究siRNA 干扰SIAH 基因对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 细胞α-synuclein 泛素化、降解通路的影响。方法:用荧光标记的siRNA-FAM 转染SH-SY5Y 细胞后,专业设计合成3 条针对SIAH 的siRNA,Western Blot 检测蛋白水平SIAH 表达的变化,筛选出其中最高效的1 条siRNA,用CCK-8 法检测该siRNASIAH干扰SH-SY5Y 细胞活性;流式细胞技术检测该siRNA-SIAH 干扰SH-SY5Y 细胞凋亡的影响;Western Blot检测α-synuclein、LC3、E1、P53 蛋白水平表达的变化;qRT-PCR 检测SIAH、α-synuclein、LC3、E1 mRNA水平表达的变化;免疫共聚焦分别检测SIAH、α-synuclein、LC3 共定位情况。结果:3 条siRNA 均成功转染SH-SY5Y 细胞,流式细胞术检测siRNA 转染SH-SY5Y 细胞转染率89%,Western 结果显示其中siRNA-2# 使细胞中SIAH 蛋白表达明显降低,选取该序列进行研究。CCK-8 法结果显示该siRNA 干扰SIAH 后对SH-SY5Y细胞活增高,流式细胞技术检测结果显示该siRNA 干扰SIAH 可抑制SH-SY5Y 细胞的凋亡,与空白对照组、阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过Western Blot 检测siRNA-2# 组的α-synuclein、LC3、P53 蛋白水平,与空白对照组、阴性对照组比较均明显降低,E1 蛋白水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过qRT-PCR 检测siRNA-2# 组的SIAH、α-synuclein、LC3- Ⅱ mRNA 水平与空白对照组、阴性对照组比较均明显降低,而E1 的mRNA 水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用siRNA 干扰SIAH 基因,通过促进泛素- 蛋白酶体系统作用减少SH-SY5Y 中α-synuclein 聚集,SIAH 基因有可能成为帕金森病治疗中的一个新靶点。
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关键词 帕金森病E3 泛素连接酶α-synuclein泛素化蛋白酶体    
    
基金资助:江苏省自然基金面上项目(BK2011402)
通讯作者: 李小民   
引用本文:   
徐晶① 张馨芝① 张永进① 李秀明① 王敏① 蔡增林① 李小民①. siRNA干扰SIAH对细胞活性和α-synuclein泛素化降解通路的影响*[J]. 中国医学创新, 2015, 12(27): 1-5.
XU Jing,ZHANG Xin-zhi,ZHANG Yong-jin,et al.. Effect of siRNA Interference SIAH on Cell Activity and α-synuclein Ubiquitin Degradation Pathway. 中国医学创新, 2015, 12(27): 1-5.
链接本文:  
http://www.zgyxcx.com/CN/10.3969/j.issn.1674-4985.2015.27.001     或     http://www.zgyxcx.com/CN/Y2015/V12/I27/1
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