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| siRNA干扰SIAH对细胞活性和α-synuclein泛素化降解通路的影响* |
| ①徐州医学院附属连云港医院 江苏 连云港 222002 |
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| Effect of siRNA Interference SIAH on Cell Activity and α-synuclein Ubiquitin Degradation Pathway |
| Affiliated Lianyungang Hospital of Xuzhou Medical College，Lianyungang 222002，China |
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摘要 目的：研究siRNA 干扰SIAH 基因对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 细胞α-synuclein 泛素化、降解通路的影响。方法：用荧光标记的siRNA-FAM 转染SH-SY5Y 细胞后，专业设计合成3 条针对SIAH 的siRNA，Western Blot 检测蛋白水平SIAH 表达的变化，筛选出其中最高效的1 条siRNA，用CCK-8 法检测该siRNASIAH干扰SH-SY5Y 细胞活性；流式细胞技术检测该siRNA-SIAH 干扰SH-SY5Y 细胞凋亡的影响；Western Blot检测α-synuclein、LC3、E1、P53 蛋白水平表达的变化；qRT-PCR 检测SIAH、α-synuclein、LC3、E1 mRNA水平表达的变化；免疫共聚焦分别检测SIAH、α-synuclein、LC3 共定位情况。结果：3 条siRNA 均成功转染SH-SY5Y 细胞，流式细胞术检测siRNA 转染SH-SY5Y 细胞转染率89%，Western 结果显示其中siRNA-2# 使细胞中SIAH 蛋白表达明显降低，选取该序列进行研究。CCK-8 法结果显示该siRNA 干扰SIAH 后对SH-SY5Y细胞活增高，流式细胞技术检测结果显示该siRNA 干扰SIAH 可抑制SH-SY5Y 细胞的凋亡，与空白对照组、阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。通过Western Blot 检测siRNA-2# 组的α-synuclein、LC3、P53 蛋白水平，与空白对照组、阴性对照组比较均明显降低，E1 蛋白水平增高，差异均有统计学意义（P<0.05）。通过qRT-PCR 检测siRNA-2# 组的SIAH、α-synuclein、LC3- Ⅱ mRNA 水平与空白对照组、阴性对照组比较均明显降低，而E1 的mRNA 水平明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：应用siRNA 干扰SIAH 基因，通过促进泛素- 蛋白酶体系统作用减少SH-SY5Y 中α-synuclein 聚集，SIAH 基因有可能成为帕金森病治疗中的一个新靶点。
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| 关键词 ：
帕金森病,
E3 泛素连接酶,
α-synuclein,
泛素化蛋白酶体
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| 基金资助:江苏省自然基金面上项目（BK2011402） |
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通讯作者:
李小民
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